- Tema: Atenuación de la angiotensina II : hipertensión inducida en ratones de baja expresión de BubR1 mediante la represión de la sobreexpresión del receptor 1 de angiotensina II
- Mecanismo epigenómico tratado: ARN interferente pequeño
- Cómo se lo hizo:
- Se cultivaron RPTC humanos(celulas del tuvo renal proximal) en medio de crecimiento de músculo liso 2, a 37 ° C con 5% de CO 2 /95% de aire. El silenciamiento del gen BubR1 se realizó usando reactivo de transfección Lipofectamine RNAiMAX.
- Los RPTC se transfectaron con ARN interferente pequeño (si) dirigido a BubR1 (siBubR1)
- Veinticuatro horas después de la transfección de ARNip, los RPTC mediados por ARNip se trataron con 10 μmol / L de Ang II durante 24 horas y se recolectaron para su análisis.
- En las células, la expresión de proteínas se analizó mediante transferencias Western.
- Las proteínas se transfirieron a membranas microporosas de fluoruro de polivinilideno y se sondaron con anticuerpos primarios; anticuerpos monoclonales contra BubR1 , Agtr1 (Abcam; ab18801), Nox4, JNK , α ‐ tubulina o Agtr2 . Se utilizó IgG anti-conejo conjugado con HRP como anticuerpo secundario. Se utilizó Chemi ‐ Lumi One Ultra para la quimioluminiscencia y se utilizó un Amersham Imager 600 para las imágenes.
- Resultados: Los resultados de los ensayos in vitro de células del túbulo proximal renal sugieren que el tratamiento con interferente pequeño RNA de orientación BubR1 suprimida Ang II inducida por la sobreexpresión de AGTR 1. Del mismo modo, la regulación al alza en quinasa Nox4 y Jun N-terminal inducida por Ang II administración fue reprimida por tratamiento con un pequeño ARN de interferencia dirigido a BubR1.
Referencias
